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多肽合成服務訂購指南

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南京肽業多肽合成服務訂購指南

 

1. 如何在南京肽業訂購多肽?

請將您所需多肽名稱、序列、純度、量要求,發送郵件至 [email protected]  或撥打電話025-58361106聯系南京肽業生物科技有限公司。南京肽業生物科技有限公司將為您提供高質量的多肽定制合成服務! 歡迎惠顧!

 


2. 多肽溶解

    溶解多肽是非常復雜的事情,一般很難一下子確定合適的溶劑。通常是先取一點試驗,在沒有確定合適的溶劑前千萬不要全部溶解。

    下列方法有助于您選擇合適的溶劑:

(1) 判定多肽的電荷特定,設定酸性氨基酸Asp(D),Glu(E)CCOOH-1;堿性氨基酸Lys(K),Arg(R),His(H)NNH2+1,其它氨基酸的電荷為0。計算出將電荷數。

(2) 如果凈電荷數>0,多肽為堿性,用水溶解:如果不溶解或溶解性不大,加入醋酸(10%以上);如果多肽還不能溶解,加入少量TFA(25ul)溶解,然后加入500ul水稀釋。

(3) 如果凈電荷數<0,多肽為酸性,用水溶解;如果不溶解或溶解性不大,加入氨水(25ul)溶解,然后加入500ul水稀釋。

(4) 如果凈電荷數=0,多肽為中性,含有大量不帶電荷的極性氨基酸殘基或疏水性氨基酸的疏水性多肽和中性多肽可先溶解于少量有機溶劑中,如DMSODMF、醋酸、乙腈、甲醇、丙醇或異丙醇,然后加水(蒸餾水)稀釋。含有甲硫氨酸或半胱氨酸的多肽不能用DMSO溶解,因為DMSO可能造成側鏈氧化。還有人建議需要尿素來溶解。對于含有自由半胱氨酸的肽,需使用DMF而不是DMSO。對于疏水性很大的多肽,可添加6M鹽酸胍或8M尿素,然后進行必要的稀釋。

為了防止或盡量減少多肽降解,請將多肽以凍干粉形式保存在-20°C或更低溫度更佳。如果需要保存溶液肽,最好分成小樣存放,以避免反復凍融。一份樣品融凍后未用完,應扔掉。細菌降解有時會成為溶液肽的麻煩,所以請將肽溶于無菌水或肽溶液過濾除菌。

堿性氨基酸:Lys(K),  Arg(R), His (H) , Orn

酸性氨基酸: Asp(D),  Glu(E),


3. 一個肽段是否可溶能預測嗎?

我們無法通過研究多肽的結構來預測其在水中的溶解度。我們不能保證最終產品在水中,或者其他溶劑中的溶解性。

然而,賴氨酸的ε-氨基和精氨酸的胍通常有助于預測溶解度,尤其是短肽。與此相反,含有天門冬氨酸和谷氨酸的酸性肽往往是不易溶于水的,但易溶于稀氨水或堿性緩沖液。

 

4. 多肽的純度(HPLC)多肽含量(Peptide Content)

多肽的純度(HPLC)多肽含量(Peptide Content)意義不同,訂購多肽之前需要明確。

案例:1g 多肽  HPLC 98% 純度, 80% 多肽含量,水含量10%TFA含量10%

稱重:1g

多肽部分:800mg  【其中784mg 是目的多肽(多肽部分的 98%)16mg 是其他肽雜質 (多肽部分的 2%)

水部分:100mg

鹽部分: TFA 100mg

一般訂購多肽純度指標,指的是HPLC純度。

 

具體解釋:

多肽的純度是指HPLC方法在220nm處檢測到的目標多肽的含量(220nm是肽鏈的吸收波長),紫外分光光度計檢測不到水和殘留的鹽不。可發現其他的雜質包括:缺失序列(缺失了一個或多個氨基酸殘基的靶序列),截斷序列(加帽過程中產生的序列)脫保護不完全序列(產生于整個合成過程或最后的裂解過程)

多肽純化不涉及水和鹽。HPLC純化會產生少量的TFA(三氟乙酸),如:游離的氨基末端和其他側鏈如ArgLysHis都可生成少量TFA雜質。通常交付的多肽多含有微量TFA和殘留水。即使處于凍干狀態,水也會因共價結合的能力不同而不同程度地存在著。

純化前的多肽中包含的雜質包括多肽和非多肽物質, 純化后的多肽中包含的雜質除了TFA鹽,大多數為序列被修改的多肽。

     a.缺失了一個或多個氨基酸殘基的靶序列

     b.為避免缺失序列的產生而進行的加帽操作,截斷序列即產生于加帽過程中

     c. 產生于整個合成過程或最后的裂解過程

     d.保護基重新附著在多肽的其他位置  

如果對鹽有特殊要求,請在詢價時,明確一下(脫鹽,轉成醋酸鹽 等)。如果不注明,做成的多肽都是TFA(三氟乙酸)鹽形式。

注意,南京肽業生物科技有限公司使用的HPLC 測試體系如下:

Solvent  A: 0.1%Trifluoroacetic in 100% Acetonirile

Solvent  B: 0.1%Trifluoroacetic in 100% Water

Flow rate:1.0ml/min

Wavelength:220nm

色譜柱:C18 反相柱

 

如果您有特殊的分析條件(色譜條件),請在訂購之前告知,我們將和商討。如果您沒有特殊要求,我們的測試條件就是上述常用的體系。

 

多肽含量(Peptide Content)是指與非肽物質(主要為抗衡離子和水)相比的多肽量。可通過氨基酸分析來確定肽凈含量。如果您需要這項服務請在訂單上明確。


5. 南京肽業生物科技有限公司如何對合成的多肽進行質檢?

產品將附完整的檢測報告,包括:HPLC圖譜;質譜;合成報告(COA)。

(如有特殊需要,可提供核磁,紅外,紫外,元素分析,水分含量測定以及氨基酸分析服務,這些服務需要另外收費)


6. 南京肽業生物科技有限公司對合成的多肽提供分裝服務嗎?

根據要求,本公司每個樣品可以在10管以內免費分裝,如果需要分裝更多管數,超過10管部分,每管加收8元。由于少量分裝可以避免多次反復凍融,減少容器的開蓋和閉合的次數,減少處理不當或細菌污染的機會,讓您的多肽更加穩定。

 

7.定制多肽的活性能保證嗎?

定制多肽的活性受多個因素的影響。南京肽業生物科技有限公司能保證的是產品的序列正確 (Mass 結果保證),純度達標(HPLC 結果保證)。 對于活性,由于沒有專門的測試方法,所以不能保證。

有幾個因素可能對確保活性有所幫助:

A.  一般完工的定制多肽為TFA 鹽形式,如果客戶需要研究多肽的電荷等情況,需要要求將多肽脫鹽。

B.    一般完工的定制多肽為TFA 鹽形式, 有的客戶會要求將其轉為醋酸鹽。

 

8. 定制的多肽能保證多肽在特定溶液中的溶解性嗎?

我們無法通過研究多肽的結構來預測其在水中的溶解度。我們不能保證最終產品在水中,或者其他溶劑中的溶解性。

然而,賴氨酸的ε-氨基和精氨酸的胍通常有助于預測溶解度,尤其是短肽。與此相反,含有天門冬氨酸和谷氨酸的酸性肽往往是不易溶于水的,但易溶于稀氨水或堿性緩沖液。

如果訂購多肽超過10mg 的話,南京肽業可以測試室溫條件下1mg多肽在0.5~1ml DMF,水中的溶解情況,

 

9.多肽保存

多肽一般長期保存需要避光保存,并應保存在-20度以下,-80°C效果更好,短期可以保存在4℃。可以短時間以室溫運輸。多肽在-20℃或更低溫度很穩定,特別是冷凍干燥并保存在干燥器中時。

在打開包裝和稱重前,請先將多肽在干燥器中平衡至室溫,未經平衡到室溫的多肽在打開蓋子后易有水份凝結,會降低了多肽產品的穩定性。

含有Cys, Met or Trp的多肽容易氧化,脫氧緩沖劑對其溶解必不可少,因為這種多肽容易空氣氧化, 在封瓶前,氮氣或氬氣保護會降低氧化作用。含GlnAsn的多肽比較容易降解,所有這些肽與不含這些有問題的簡單肽相比,保存期要短。

 N端第一個氨基酸是Gln的的多肽非常不穩定,幾天內會發生降解,建議在設計序列時,不讓GlnN端出現。


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